Sezioni sottili a mano o con microtomo

[Dunadan]

Salve,
dovendo studiare muschi mi trovo a dover effettuare sezioni sottili di fusticini e foglie molto piccole. Fino ad adesso ho usato il metodo dei due vetrini con il campione da sezionare stretto tra i due che poi vado a tagliare con una lametta da trincetto. Purtroppo devo sempre affettare una grande quantità di campioni prima di trovare una sezione decente e spesso non riesco comunque a farne di abbastanza sottili da permettermi di posizionarle, oppure di vederne bene le cellule a causa dello spessore ancora troppo grande. La conclusione è che mi ci vuole veramente un sacco di tempo per ottenere delle sezioni decenti e questo rallenta non di poco il mio lavoro.

Ho anche un microtomo a mano e ho provato ad includere in paraffina i campioni e poi sezionarli con una lama da rasoio (in dotazione col microtomo), ma anche con questo metodo ho diversi problemi:
- la paraffina si arriccia durante il taglio e non mi permette nè di stenderla in una padella con acqua riscaldata, nè di togliere manualmente le sezioni
- quando ho sciolto le sezioni di paraffina (o meglio i riccioli...) in acqua calda resta il problema di separare il materiale vegetale dalla paraffina
- anche questo metodo porta via molto tempo: sciogliere la paraffina, lasciarvi i campioni in ammollo per una mezzora, toglierli, includerli nei blocchetti, aspettare che asciughino, sezionare e separare le sezioni dalla paraffina.... un lavoro troppo lungo che non mi permette di classificare le specie abbastanza velocemente.

Mi chiedo dunque se esistano degli accorgimenti per velocizzare il processo e/o migliorare la qualità delle sezioni. Esiste qualche modo per evitare l'arricciarsi della paraffina durante il taglio? Non so, per esempio bagnando il tutto con qualche sostanza? E' possibile costruire qualche marchingegno (magari riciclando il microtomo a mano) che permetta di risolvere questi problemi?

[Enotria]

A causa della mia pigrizia, non ho molta esperienza con le micro sezioni, ancora meno con la paraffina.

Normalmente, quando devo fare una sezione di un tessuto delicato, lo inserisco all'interno di una carota di polistirolo espanso tagliata a metà.

Microtomo a mano con carota di polistirolo.

Nella foto vedi bene il cilindro diviso a metà e che trattiene l'oggetto.

Per la verità non so che tipo di sezioni devi fare e che cosa vuoi mettere in evidenza, ma forse potresti provare anche a congelare prima il campione, in modo da renderlo più rigido nel momento del taglio.

[Dante]

Bella l'idea del congelamento... Enotria ne sa sempre una più del diavolo
Con inclusione in paraffina e microtomo dovresti ottenere sezioni perfette e riproducibili. Se le fettine sono troppo arricciate controlla l'affilatura della lama, magari prova anche con una lama da bisturi nuova. Poi con l'aiuto di un pennellino le fettine vanne sistemate in una vaschetta con acqua distillata riscaldata (40-45 gradi) e successivamente ad asciugare su di un vetrino, sempre riscaldato; infine per eliminare tutta la paraffina immersione in xilene o altro solvente in cui la paraffina è solubile (arieggiare e mascherina perché sono tutti veleni, però per noi indispensabili) e poi asciugare di nuovo se usi un montante moderno come il magnacol o simili, oppure ancora impregnato di xilene se usi il "vecchio" balsamo del Canada... Volendo in mezzo ci sta la colorazione... Ma quella è un'altra storia

[Dunadan]

Avevo provato con la carota (quella vera!), ma magari proverò anche col polistirolo! Purtroppo ho scoperto che la lama del rasoio che era incluso col microtomo, comprato da -un noto negozio-, è mezza storta........potrebbe essere un motivo dell'arricciamento.
Comunque sia le procedure con la paraffina sono troppo lunghe per i miei scopi e devo trovare un'alternativa rapida ed efficace perchè altrimenti mi ci vuole un giorno solo per identificare una specie! Per ora lo faccio giusto per imparare la tecnica, ma dovrò procurarmi un rasoio che funzioni....!

[piermicro]

Per fare buone sezioni occorre un buon microtomo e una BUONA lama. Tutto il resto è fantasia.
Inoltre è fondamentale la preparazione del campione,senza questa tutto frana.

[Dunadan]

Certamente è necessaria una buona tecnica....
Per ora posso dirmi soddisfatto dei risultati ottenuti, anche se richiede parecchio tempo, ma sempre meno che con le sezioni in paraffina! Spero di velocizzarmi con la pratica!

[Dante]

Ciao Franco le sezioni sembrano comunque venute bene, anche senza tutta la procedura della paraffina e solventi! Come foto, sapendo che fotocamera usi, che obiettivi ed oculare per proiezione, devono senz'altro venire meglio. A volte basta un minimo di accorgimenti in post produzione... Appena posso ti posto qualche esempio.

[Dunadan]

Per le foto sto provando, ma non mi vengono tanto meglio di così, credo di aver provato un po' di tutto, giocando sui kelvin e sull'iso della fotocamera. Devo farmi modificare il porta oculare da proiezione in modo da poter regolare l'altezza, ma non credo che sia quello il problema. La parafocalità con gli oculari poi è un miraggio per ora...

Forse queste sono venute un po' meglio, anche qui senza stacking: