Fluorescenza, passo avanti.

[500paolo]

Mi sono sempre chiesto come fanno a venire quelle immagini con diversi colori accesi sui moderni microscopi a fluorescenza dei marchi piu' blasonati quando, in genere, a me vengono solo due colori di cui quello di sfondo del tutto spento.
Ho quindi ipotizzato che usassero fare uno stack di diverse foto prese con diverse bande di fluorescenza, ma i filmati (anche se a dir il vero non vedo)?
Ho fatto delle prove con altro sistema (non stack) e pare che mi sto avvicinando, giudicate voi:

Ho allegato solo una foto per non appesantire il forum, le altre le trovate a piena risoluzione quì:
https://drive.google.com/drive/folders/ ... sp=sharing

Il solito video:
[youtubenew]CrzBJwnWmJ8[/youtubenew]

Pur troppo il campione d'acqua che avevo a disposizione sta gia' "morendo", ma quello su cui mi interesserebbe provare sono i neuroni...

[Dunadan]

Non è che prendi come paragone delle immagini di confocali?

[arturoag75]

Paolo non so di quali strumenti tu disponi comunque i microscopi più recenti e anche quelli meno recenti permettono la fluorescenza a banda singola, doppia, tripla e quadrupla.
In base all'utilizzo di determinati fluorocromi E combinazione di filtri si può avere una selezione della banda passante oppure tutte insieme.
Arturo

[500paolo]

No, non parlo del confocal dove e' logico che vi siano piu' colori dato che vi sono due o piu' sezioni che lavorano con i filtri specifici per diverse bande di fluorescenza, poi tramite prismi le immagini vengono sovrapposte, ma tipo questo dalla pagina 6 in poi:

https://applications.zeiss.com/C1257929 ... 0037_e.pdf

Mi sembra di capire che alla fine viene fatta una sovrapposizione in post elaborazione/produzione per ottenere l'immagine finale...

Oppure quì dove le gallerie sono separate tra fluorescenza e confocal (verso la fine della pagina) :

https://www.microscopyu.com/techniques/fluorescence

Insomma quando parlano di semplice fluorescenza, le immagini sono mai "semplici" e non scrivono mai come sulle confezioni degli alimenti "l'immagine a solo lo scopo di presentare il prodotto"

[500paolo]

Paolo non so di quali strumenti tu disponi comunque i microscopi più recenti e anche quelli meno recenti permettono la fluorescenza a banda singola, doppia, tripla e quadrupla.
In base all'utilizzo di determinati fluorocromi E combinazione di filtri si può avere una selezione della banda passante oppure tutte insieme.
Arturo

Quindi parli di unica illuminazione e unico percorso ottico, di un filtro "passa banda" per le sole bande di fluorescenza. Sicuramente sara' così, certo immaginare un filtro che lasci passare solo certe bande, molto lontane fra loro, e con un taglio così netto...

[arturoag75]

..credo che principalmente c'entrino i fluorocromi... un po' come accade con le sezioni vegetali colorate con tre colori anche.

[500paolo]

Ho capito, hai fatto bene a ripeterlo, sono "coloranti" specifici per fluorescenza...

[arturoag75]

Esattamente