Colorazione del nucleo

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Moderatore: Enotria

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3nzo
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Colorazione del nucleo

Messaggio da 3nzo »

Salve, ho problemi nel colorare selettivamente il nucleo delle cellule vegetali.
Ho provato con blu di metilene e con violetto di genziana in soluzione acquosa in varie concentrazione e con vari tempi, ma la colorazione non riesce bene. Se coloro molto si colorano anche le pareti cellulari e il preparato appare troppo scuro e non si schiarisce con lavaggio ripetuto; se cerco di scolorire con soluzione debole di alcool, si scolora tutto. Se uso una colorazione a bassa concentrazione o per tempi brevi si colora solo la parete cellulare.
Qualcuno sa indicarmi la procedura corretta oppure dove posso trovarla? Grazie.
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Toniclimb
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Re: Colorazione del nucleo

Messaggio da Toniclimb »

Ciao Enzo.
Mi sa che se usi uno solo dei due coloranti sia inevitabile che ti si colori anche la parete e il citoplasma.
Per contrastare meglio prova a usare anche un secondo colorante di contrasto, tipo eosina, per esempio, specifico per il citoplasma e/0 per la paree.
Saluti.
Toni.
3nzo
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Re: Colorazione del nucleo

Messaggio da 3nzo »

Grazie, ho provato, ma l'eosina era in soluzione alcoolica e passavo da tutto viola, o blu se usavo il blu di metilene, a tutto rosa, nuclei compresi. Ora ho ordinato l'eosina in soluzione acquosa e riproverò.
Comunque, colorando 5 minuti con violetto o blu si colora tutto e lavando ripetutamente in acqua le pareti non si scolorano. Poiché le sezioni le faccio col microtomo a mano, non sono abbastanza sottili e più strati di cellule colorate rendono il preparato poco leggibile.
Per accelerare i tempi delle prove ho pensato di usare la pellicola interna della cipolla, ma qui sorge un altro problema, cioè la pellicola si accartoccia ed è difficile stenderla sul vetrino senza danni.
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Toniclimb
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Re: Colorazione del nucleo

Messaggio da Toniclimb »

L'eosina in soluzione alcolica dove l'avevi trovata? per caso era "Neomercurocromo"?
Toni
3nzo
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Re: Colorazione del nucleo

Messaggio da 3nzo »

Si. Mi sono accorto poi che la soluzione 1% di violetto di genziana determina una pressione osmotica che sottrae acqua dalle cellule e fa agglutinare, se si può dire, il citoplasma. Infatti si ritrova al centro della cellula come una massa allungata; proverò diluirla. Sai come si può valutare la pressione osmotica di soluzioni? Mi spiego, serve avere una idea della concentrazione della soluzione rispetto a quella delle cellule. Penso che le cellule vegetali abbiano una concentrazione di sali in un range che dovrebbe essere noto.
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Toniclimb
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Re: Colorazione del nucleo

Messaggio da Toniclimb »

3nzo ha scritto: 09/04/2020, 11:45 Sai come si può valutare la pressione osmotica di soluzioni?
Boh, è roba da chimici..
3nzo
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Re: Colorazione del nucleo

Messaggio da 3nzo »

:?: :?: :wave:
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arturoag75
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Re: Colorazione del nucleo

Messaggio da arturoag75 »

Ciao Enzo
Blu di toluidina!
Anni fa ci ho colorato i cromosomi!👍
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Toniclimb
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Re: Colorazione del nucleo

Messaggio da Toniclimb »

Questo
CipNuclei.JPG
è col blu di metilene.
Toni
3nzo
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Re: Colorazione del nucleo

Messaggio da 3nzo »

Che diluizione 1% o meno? E quanto tempo? A me si colora anche la parete (per rapidità faccio le prove con la cipolla).
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Toniclimb
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Re: Colorazione del nucleo

Messaggio da Toniclimb »

Ho usato anch'io la pellicola che separa i catafilli del bulbo della cipolla.
passo in HCl 1M per 10 min, poi lavaggi in acqua per eliminare l'acido prima del colorante
La diluizione è circa 0.5%, 5 minuti e poi lavaggi ripetuti in acqua finchè questa resta praticamente incolore.
Per la diluizione parto da 1% in soluzione acquosa che allungo 1:1 al momento dell'uso.
Toni
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Re: Colorazione del nucleo

Messaggio da 3nzo »

Grazie per i consigli :thumbup:
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Re: Colorazione del nucleo

Messaggio da Toniclimb »

Qui ho usato blu di metilene + eosina:
BluMet_Eosina_Rid.jpg
Si vedono membrane, struttura del citoplasma e nucleoli.
Saluti.
Toni
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Re: Colorazione del nucleo

Messaggio da 3nzo »

Ottimo, tutto sta nel colorare i nuclei e poco altro nel primo passaggio.
Si vede che la parete è stata attaccata dall'acido, ma lo scopo, la colorazione del nucleo, è raggiunto.
La concentrazione di 1M come è stata scelta, per tentativi?
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Toniclimb
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Re: Colorazione del nucleo

Messaggio da Toniclimb »

Consigliata dai sacri testi.

http://www.funsci.com/fun3_it/mitosi/aglio.htm

Col trattamento in HCl si evita anche l'arriciamento dei frammenti, si manipolano molto più facilmente.
Il tempo di trattamento è da sperimentare, se ce lo tieni troppo si sfalda tutto e le cellule se ne vanno a spasso.
3nzo
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Re: Colorazione del nucleo

Messaggio da 3nzo »

Grazie del link. Non riesco a capire perché un bicchiere non andrebbe bene :)
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Re: Colorazione del nucleo

Messaggio da Toniclimb »

Se invece esageri con l'hCl (troppo caldo, troppo tempo, troppo concentrato) avviene questo:
HCl_rid.JPG
Stesso soggetto, ma le cellule se ne vanno per i fatti loro.
Toni
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Re: Colorazione del nucleo

Messaggio da 3nzo »

Mi sono procurato il necessario, spero la settimana prossima di fare una prova di colorazione del nucleo con una pellicola di cipolla. C'è un piccolo problema, forse per l'osmosi, e cioè che si arrotola e diventa difficile maneggiarla. Forse col passaggio in acido non si verificherà, ma hai qualche dritta in proposito?
Dunadan
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Re: Colorazione del nucleo

Messaggio da Dunadan »

Mettila sotto un coprioggetto e colora aggiungendo i reagenti dopo. Ogni volta "asciuga" il vetrino accostando un po' di carta al bordo del coprioggetto.
Il mio blog di microscopia ottica ed elettronica: https://nidhoggmicroscopy.wordpress.com/
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Re: Colorazione del nucleo

Messaggio da 3nzo »

Farò così, ma ho visto che non sempre la colorazione è uniforme.
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Toniclimb
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Re: Colorazione del nucleo

Messaggio da Toniclimb »

Con l'acido diventa molto più malleabile, se esageri anche troppo. Va bene anche il coprioggetto, lo devi muovere e sollevare appena per distribuire uniformemente il colorante.
3nzo
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Re: Colorazione del nucleo

Messaggio da 3nzo »

OK, grazie :thumbup:
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