Limite massimo della risoluzione

Fotografie, filmati e descrizioni del micromondo animato e inanimato

Moderatore: Enotria

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Bellotti E.
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Limite massimo della risoluzione

Messaggio da Bellotti E. »

Buonasera a tutti, voglio condividere con voi i miei risultati. Penso di essere riuscito ad ottenere con il mio attempato zeiss standard 16 il suo limite. Sono riuscito a risolvere i poroidi di una Pinnularia viridis (stimati in 0,11 micron) e le strie della famigerata Amphipleura pellucida. La prima fa parte di uno dei vetrini che preparato io, la pellucida è invece l'ultima diatomea del famoso "8 test plate" del compianto Klaus K. Kemp.
Amphipleura pellucida
Amphipleura pellucida
Ho impiegato 2 anni per riuscire a fotografare questa diatomea, considerata una delle più difficili da risolvere. Non è stata la strumentazione ad ostacolarmi, ma mi mancava l'esperienza. In realtà ho risolto solo le strie, manca l'ultimo passo, risolvere anche i singoli dot. Sono convinto che utilizzando un tavolino rotante sarò in grado di orientata e ottenere la risoluzione massima. La prossima è la Pinnularia viridis. È una diatomea molto grande. Questo è il vetrino dal quale l'ho fotografata, li faccio io, utilizzando i migliori materiali(che ho faticosamente trovato in giro per la rete)
Bellotti E. Test slide
Bellotti E. Test slide
Pinnularia poroids
Pinnularia poroids
Poroids zoom
Poroids zoom
Come potete vedere, dalle misurazioni, e dalle informazioni che ho trovato in rete, questi poroidi sono grandi circa 0,11micron l'uno, perciò vìolano in qualche modo il limite teorico massimo di risoluzione dei microscopi ottici(che è circa 0,2 micron). Per ottenere queste foto ho usato il mio microscopio Zeiss standard 16 equipaggiato con il condensatore zeiss inko dic seconda serie, e un obiettivo Lomo apo 90x 1.3 (già famoso in questo forum). Immersione in olio doppia, lente del condensatore acr. apl. da 1,4. Polarizzazione massima, esposizione della camera usb(5mp)massima, e un filtro da fluorescenza marcato 410.Dagli oculari non vedevo quasi nulla. Ovviamente ho editato le foto con gimp, per enfatizzare l'informazione (purtroppo qui posso postare solo screenshot delle immagini, quindi non sono alla risoluzione originale, spero rendano l'idea comunque). Che dire, sono davvero soddisfatto, ed è leggendo tutti voi, e le vostre esperienze, che sono riuscito ad ottenere questi risultati. Per finire aggiungo la diatomea 7 sempre del vetrino di Kemp: Frustulia rhomboides.
In DIC:
Frustulia dic
Frustulia dic
E con la tecnica della polarizzazione:
Frustulia pol
Frustulia pol
Da notare come il contrasto di interferenza "appiattisca" la frustulia, che appare della sua reale forma con la polarizzazione.
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vale75
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Re: Limite massimo della risoluzione

Messaggio da vale75 »

Complimenti sia per il risultato raggiunto (impensabile per me anche solo immaginarla una risoluzione simile), sia per il vetrino davvero spettacolare.
Il mio kemp test plate ormai é a brandelli e alla pellucida ci rinunciai ad osservarla.
Quel lomo 90x/1.30 ce l'ho anch'io e in effetti é un grandissimo obiettivo che asfalto', senza battere ciglio, uno zeiss 100x/1.25.
Alla faccia di chi snobba tutto ciò che è "a est".
Bellotti E.
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Re: Limite massimo della risoluzione

Messaggio da Bellotti E. »

Beh, se tu hai il lomo 90x allora anche tu non avrai difficoltà a risolvere i poroidi. Io come polarizzatore ho usato una pellicola per iphone polarizzatrice, l'ho pagata pochi euro su ebay. L'ho tagliata ed applicata ad un vetro da orologio da 32mm (sempre preso su ebay a pochi euro) per fare il polarizzatore. Per l'analizzatore invece ho utilizzato sempre la stessa pellicola, incollata questa volta ad un filtro per fluorescenza che inserisco nel tubo intermedio. Sul filtro è marcato 410nm, e sinceramente non ti so dire come funziona(non ho ancora capito se lascia passare tutto sopra i 410nm quindi dovrebbe trasmettere blu, indaco violetto, UVA, UVB... O tutto sotto i 410nm quindi dovrebbe far passare azzurro, verde, giallo, rosso, IR etc etc). Che condensatore hai?
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vale75
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Re: Limite massimo della risoluzione

Messaggio da vale75 »

Come polarizzazione comprai un filtro lunare orion 31.8 da telescopio, che diviso in 2 mettevo nel portafiltri e alla base del revolver dentro, ma non l'ho usato quasi mai.
Le mie osservazioni microscopiche sono molto banali, al massimo il sangue, qualche diatomea o le foglie di felce.
Condensatore ho il classico zeiss 1.3 a scamotto e un aplanatico 1.4 , che presi per curiosità, ma usato 2 volte in tutto.
Quest'anno poi sono praticamente fermo.
Bellotti E.
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Re: Limite massimo della risoluzione

Messaggio da Bellotti E. »

Allora hai tutto, con l'aplanatico da 1,4 e il lomo 90x hai in tasca uno strumento eccezionale. Qualche vetrino con diatomee da testare ce l'hai?
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vale75
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Re: Limite massimo della risoluzione

Messaggio da vale75 »

Ho mezzo vetrino di kemp, con le diatomee che ormai vagano libere.
Per curiosità, un vetrino come quello che hai postato, a quanto lo vendi?

Ps.un'osservazione memorabile (e pazza) ce l'ho anch'io: i cristalli di neve per pochi secondi, mettendo fuori durante la tempesta il microscopio e vetrino messo precedentemente nel congelatore. 8-)
Bellotti E.
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Re: Limite massimo della risoluzione

Messaggio da Bellotti E. »

Di solito i miei vetrini, dopo che li ho usati un po' li metto in asta su ebay, con prezzo di partenza 1€. A volte il prezzo sale a qualche decina di euro, a volte resta basso, non so perché. Questi sono altri due vetrini che ho fatto da poco.
IMG_20220622_111812.jpg
IMG_20220622_111844.jpg
Bellotti E.
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Re: Limite massimo della risoluzione

Messaggio da Bellotti E. »

In realtà mi sono fissato sulle diatomee da quando ho il microscopio, del resto della natura me ne sto completamente disinteressando. Il cristallo di ghiaccio è una ottima idea, hai qualche foto?
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vale75
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Re: Limite massimo della risoluzione

Messaggio da vale75 »

Non vorrei inquinare il tuo post, poi le foto sono vergognose, perciò ne metto solo una collage con: mio osservatorio :lol: , 2 cristalli di neve che in 5 secondi erano gia' sciolti e l'ultima sarebbe la -pioggia gelata- del giorno successivo, di cui ignoravo l'esistenza.
(Usato un semplice zeiss 10/0.22 e oculari huygens kpl 8x , per evitare possibili delaminazioni con lo shock termico esterno)
Allegati
20220622_114606_1.jpg
Bellotti E.
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Re: Limite massimo della risoluzione

Messaggio da Bellotti E. »

Veramente bellissime le foto, devo studiare un metodo per fare una foto ad un fiocco di neve senza mettere il microscopio fuori.
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vale75
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Re: Limite massimo della risoluzione

Messaggio da vale75 »

Temo sia impossibile, già col vetrino appena uscito dal congelatore , iluminazione a led al minimo e microscopio ad acclimatare fuori, non duravano che pochi secondi.
Con la testa trinoculare però puoi sicuramente guadagnare il tempo che perdevo io a prendere il cellulare e centrare l'oculare.
Il più è trovare la neve, qua in pianura padana non viene più.
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Re: Limite massimo della risoluzione

Messaggio da Dunadan »

Bellotti E. ha scritto: 22/06/2022, 16:16 Veramente bellissime le foto, devo studiare un metodo per fare una foto ad un fiocco di neve senza mettere il microscopio fuori.
Vetrino fra due celle peltier e sei a posto
Il mio blog di microscopia ottica ed elettronica: https://nidhoggmicroscopy.wordpress.com/
Bellotti E.
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Re: Limite massimo della risoluzione

Messaggio da Bellotti E. »

Grazie del consiglio, non ne conoscevo l'esistenza! Visto che sei intervenuto ne approfitto per farti una domanda. Come hai visto, l'argomento del mio post verte sulla risoluzione massima del microscopio. Io non sono un ingegnere, e di ottica teorica non me ne intendo. So che il limite di risoluzione massima dei microscopi ottici è 0,2 micron, ovvero la capacità di distinguere due punti vicini, purché grandi almeno 0,2micron. Oggi ho calibrato il programma di acquisizione che utilizzo(Toupview) e ho effettuato la mia misurazione dei poroidi. La grandezza va da 0.10µm a 0.12µm. La mia domanda è : come è possibile?
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Re: Limite massimo della risoluzione

Messaggio da Dunadan »

Bellotti E. ha scritto: 22/06/2022, 23:00 Grazie del consiglio, non ne conoscevo l'esistenza! Visto che sei intervenuto ne approfitto per farti una domanda. Come hai visto, l'argomento del mio post verte sulla risoluzione massima del microscopio. Io non sono un ingegnere, e di ottica teorica non me ne intendo. So che il limite di risoluzione massima dei microscopi ottici è 0,2 micron, ovvero la capacità di distinguere due punti vicini, purché grandi almeno 0,2micron. Oggi ho calibrato il programma di acquisizione che utilizzo(Toupview) e ho effettuato la mia misurazione dei poroidi. La grandezza va da 0.10µm a 0.12µm. La mia domanda è : come è possibile?
Forse un errore nella calibrazione. Inoltre, la risoluzione può (difficilmente si arriva a tanto) arrivare a 200nm o anche meno, ma ciò si verifica solo in certe condizioni ottimali che difficilmente si possono raggiungere con i microscopi convenzionali. In realtà, i punti possono essere distinti anche se misurano meno di 200nm, basta che siano distanti almeno 200nm. Se provi a guardare sfere di 100nm, in fluorescenza per esempio, le riesci comunque a vedere, ma come pallini diffratti, con i loro begli anelli di Airy.
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Re: Limite massimo della risoluzione

Messaggio da Bellotti E. »

Sulla calibrazione non credo di avere commesso errori, certo magari c'è comunque un errore implicito non essendo un programma professionale. Invece la distanza tra i poroidi l'ho misurata e va da 0,22 a 0,25 micron, forse è questa la chiave di lettura.
3nzo
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Re: Limite massimo della risoluzione

Messaggio da 3nzo »

Salve, se ben ricordo, la calibrazione con ToupView si fa per un certo obiettivo, visionando sul monitor al 100% il micrometro oggetto e riportando i micron totali di una linea che comprende un certo numero di tacche da 10 micron. Questa calibrazione si fa perciò su dimensioni molto più grandi dei 0,2 e con il 90x le linee del micrometro appaiono ingrandite. Una corrispondenza identica ai bordi di partenza e arrivo è critica. Credo che una misura su frazioni di micron possa essere facilmente imprecisa. Quello che non baglia mai è la misura della diatomea.
La A. Pellucida si può risolvere con il Lomo 90/1.30 e condensatore OI-14, anche se con immagini non presentabili, ma per curiosità, in semplice illuminazione obliqua, con acqua sul condensatore e glicerina sotto l'obiettivo, quindi non è poi così irraggiungibile. Se si vogliono belle immagini allora le cose si complicano e non posso che fare i miei complimenti all'autore.
Allegati
20200531-165758-44.jpg
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