Colorazione del nucleo
Moderatore: Enotria
Colorazione del nucleo
Salve, ho problemi nel colorare selettivamente il nucleo delle cellule vegetali.
Ho provato con blu di metilene e con violetto di genziana in soluzione acquosa in varie concentrazione e con vari tempi, ma la colorazione non riesce bene. Se coloro molto si colorano anche le pareti cellulari e il preparato appare troppo scuro e non si schiarisce con lavaggio ripetuto; se cerco di scolorire con soluzione debole di alcool, si scolora tutto. Se uso una colorazione a bassa concentrazione o per tempi brevi si colora solo la parete cellulare.
Qualcuno sa indicarmi la procedura corretta oppure dove posso trovarla? Grazie.
Ho provato con blu di metilene e con violetto di genziana in soluzione acquosa in varie concentrazione e con vari tempi, ma la colorazione non riesce bene. Se coloro molto si colorano anche le pareti cellulari e il preparato appare troppo scuro e non si schiarisce con lavaggio ripetuto; se cerco di scolorire con soluzione debole di alcool, si scolora tutto. Se uso una colorazione a bassa concentrazione o per tempi brevi si colora solo la parete cellulare.
Qualcuno sa indicarmi la procedura corretta oppure dove posso trovarla? Grazie.
Re: Colorazione del nucleo
Ciao Enzo.
Mi sa che se usi uno solo dei due coloranti sia inevitabile che ti si colori anche la parete e il citoplasma.
Per contrastare meglio prova a usare anche un secondo colorante di contrasto, tipo eosina, per esempio, specifico per il citoplasma e/0 per la paree.
Saluti.
Toni.
Mi sa che se usi uno solo dei due coloranti sia inevitabile che ti si colori anche la parete e il citoplasma.
Per contrastare meglio prova a usare anche un secondo colorante di contrasto, tipo eosina, per esempio, specifico per il citoplasma e/0 per la paree.
Saluti.
Toni.
Re: Colorazione del nucleo
Grazie, ho provato, ma l'eosina era in soluzione alcoolica e passavo da tutto viola, o blu se usavo il blu di metilene, a tutto rosa, nuclei compresi. Ora ho ordinato l'eosina in soluzione acquosa e riproverò.
Comunque, colorando 5 minuti con violetto o blu si colora tutto e lavando ripetutamente in acqua le pareti non si scolorano. Poiché le sezioni le faccio col microtomo a mano, non sono abbastanza sottili e più strati di cellule colorate rendono il preparato poco leggibile.
Per accelerare i tempi delle prove ho pensato di usare la pellicola interna della cipolla, ma qui sorge un altro problema, cioè la pellicola si accartoccia ed è difficile stenderla sul vetrino senza danni.
Comunque, colorando 5 minuti con violetto o blu si colora tutto e lavando ripetutamente in acqua le pareti non si scolorano. Poiché le sezioni le faccio col microtomo a mano, non sono abbastanza sottili e più strati di cellule colorate rendono il preparato poco leggibile.
Per accelerare i tempi delle prove ho pensato di usare la pellicola interna della cipolla, ma qui sorge un altro problema, cioè la pellicola si accartoccia ed è difficile stenderla sul vetrino senza danni.
Re: Colorazione del nucleo
L'eosina in soluzione alcolica dove l'avevi trovata? per caso era "Neomercurocromo"?
Toni
Toni
Re: Colorazione del nucleo
Si. Mi sono accorto poi che la soluzione 1% di violetto di genziana determina una pressione osmotica che sottrae acqua dalle cellule e fa agglutinare, se si può dire, il citoplasma. Infatti si ritrova al centro della cellula come una massa allungata; proverò diluirla. Sai come si può valutare la pressione osmotica di soluzioni? Mi spiego, serve avere una idea della concentrazione della soluzione rispetto a quella delle cellule. Penso che le cellule vegetali abbiano una concentrazione di sali in un range che dovrebbe essere noto.
- arturoag75
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Re: Colorazione del nucleo
Ciao Enzo
Blu di toluidina!
Anni fa ci ho colorato i cromosomi!
Blu di toluidina!
Anni fa ci ho colorato i cromosomi!
Re: Colorazione del nucleo
Questo
Toni
è col blu di metilene.Toni
Re: Colorazione del nucleo
Che diluizione 1% o meno? E quanto tempo? A me si colora anche la parete (per rapidità faccio le prove con la cipolla).
Re: Colorazione del nucleo
Ho usato anch'io la pellicola che separa i catafilli del bulbo della cipolla.
passo in HCl 1M per 10 min, poi lavaggi in acqua per eliminare l'acido prima del colorante
La diluizione è circa 0.5%, 5 minuti e poi lavaggi ripetuti in acqua finchè questa resta praticamente incolore.
Per la diluizione parto da 1% in soluzione acquosa che allungo 1:1 al momento dell'uso.
Toni
passo in HCl 1M per 10 min, poi lavaggi in acqua per eliminare l'acido prima del colorante
La diluizione è circa 0.5%, 5 minuti e poi lavaggi ripetuti in acqua finchè questa resta praticamente incolore.
Per la diluizione parto da 1% in soluzione acquosa che allungo 1:1 al momento dell'uso.
Toni
Re: Colorazione del nucleo
Grazie per i consigli
Re: Colorazione del nucleo
Qui ho usato blu di metilene + eosina:
Si vedono membrane, struttura del citoplasma e nucleoli.
Saluti.
Toni
Si vedono membrane, struttura del citoplasma e nucleoli.
Saluti.
Toni
Re: Colorazione del nucleo
Ottimo, tutto sta nel colorare i nuclei e poco altro nel primo passaggio.
Si vede che la parete è stata attaccata dall'acido, ma lo scopo, la colorazione del nucleo, è raggiunto.
La concentrazione di 1M come è stata scelta, per tentativi?
Si vede che la parete è stata attaccata dall'acido, ma lo scopo, la colorazione del nucleo, è raggiunto.
La concentrazione di 1M come è stata scelta, per tentativi?
Re: Colorazione del nucleo
Consigliata dai sacri testi.
http://www.funsci.com/fun3_it/mitosi/aglio.htm
Col trattamento in HCl si evita anche l'arriciamento dei frammenti, si manipolano molto più facilmente.
Il tempo di trattamento è da sperimentare, se ce lo tieni troppo si sfalda tutto e le cellule se ne vanno a spasso.
http://www.funsci.com/fun3_it/mitosi/aglio.htm
Col trattamento in HCl si evita anche l'arriciamento dei frammenti, si manipolano molto più facilmente.
Il tempo di trattamento è da sperimentare, se ce lo tieni troppo si sfalda tutto e le cellule se ne vanno a spasso.
Re: Colorazione del nucleo
Grazie del link. Non riesco a capire perché un bicchiere non andrebbe bene
Re: Colorazione del nucleo
Se invece esageri con l'hCl (troppo caldo, troppo tempo, troppo concentrato) avviene questo:
Toni
Stesso soggetto, ma le cellule se ne vanno per i fatti loro.Toni
Re: Colorazione del nucleo
Mi sono procurato il necessario, spero la settimana prossima di fare una prova di colorazione del nucleo con una pellicola di cipolla. C'è un piccolo problema, forse per l'osmosi, e cioè che si arrotola e diventa difficile maneggiarla. Forse col passaggio in acido non si verificherà, ma hai qualche dritta in proposito?
Re: Colorazione del nucleo
Mettila sotto un coprioggetto e colora aggiungendo i reagenti dopo. Ogni volta "asciuga" il vetrino accostando un po' di carta al bordo del coprioggetto.
Il mio blog di microscopia ottica ed elettronica: https://nidhoggmicroscopy.wordpress.com/
Re: Colorazione del nucleo
Farò così, ma ho visto che non sempre la colorazione è uniforme.
Re: Colorazione del nucleo
Con l'acido diventa molto più malleabile, se esageri anche troppo. Va bene anche il coprioggetto, lo devi muovere e sollevare appena per distribuire uniformemente il colorante.
Re: Colorazione del nucleo
OK, grazie